一、细胞简介： 　　细胞称呼：小鼠骨髓巨噬细胞　　平台编号:zl-053232 　　巨噬细胞源自单核细胞，属于免疫细胞，有多种功能，属不繁衍细胞群，难以长久培养。 　　巨噬细胞在吞吃和破除异物和沉沦归天细胞、分泌生物活性物资，诊疗血细胞生成与参与免疫搪塞等方面进展着庸碌的生物学作用，是一类在体内进展遑急免疫效应的细胞，为体内的稳态督察和组织郑重提供保险。 　　细胞特质 　　1)组织着手于执动作物的平常骨髓组织。 　　2)细胞温情：CD68或MAC387免疫荧光染色为阳性。 　　3)经温情细胞纯度高于90%。 　　4)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。 　　5)细胞孕育花样：圆形91porn 91porn，不限定细胞91porn 91porn，贴壁培养。 　　家具的运载和保存 　　视天气气象和运载距离遐迩91porn 91porn，公司与客户协商后采用下述花样中的一种进行。 　　1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进交运载；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法坐窝进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条款下保存1个月。 　　2)T-25培养瓶充满都备培养基后进行常温运载；收到细胞后请镜下不雅察细胞孕育状态，如铺瓶率高出85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以匡助未归天的悬浮细胞好像再次贴壁。 　　家具使用 　　1)同胞具仅能用于科研 　　2)同胞具未通过径直用于活体动物和东说念主的审核 　　3)同胞具未通过用于活体会诊的审核 　　二、诈欺 　　用于PDK1靶向AKT调控小鼠骨髓巨噬细胞向破骨细胞分化的机制有计划 　　PDK1对RANKL和MCSF疏导的小鼠骨髓巨噬细胞向破骨细胞分化产生的影响,探索一条新的破骨细胞分化调控通路,有助于潜入了解和意志破骨细胞关系骨质疏松症发生的分子生物学诊疗机制。 　　行径:(1)索要及培养C57BL/6小鼠骨髓巨噬细胞,破骨细胞疏导分化培养液承接疏导培养小鼠骨髓巨噬细胞6天,每天镜下不雅察破骨细胞孕育情况及形态学变化,抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP染色)温情破骨细胞并计数; 　　(2)破骨细胞疏导分化培养液区分疏导培养小鼠骨髓巨噬细胞0、2、4、6天,培养液中不含RANKL为对照组,两组区分在细胞培养的第0、2、4、6天区分索要细胞总RNA和总卵白,及时荧光定量PCR检测PDK1mRNA的抒发情况,BCA试剂盒测定卵白浓度,免疫萍踪法检测PDK1、AKT卵白的抒发过火磷酸化情况; 　　(3)NegativeControlsiRNA转染小鼠骨髓巨噬细胞,按照siRNA:lipofectamin2000为1:0.01-1:0.1(pmol:ul)比例鸿沟寻找转染小鼠骨髓巨噬细胞siRNA的最好浓度并规划转染效果; 　　(4)策画合成三条PDK1-siRNA并区分转染小鼠骨髓巨噬细胞,转染48h后,索要各组(空缺组、NegativeControlsiRNA组、PDK1-siRNA-1组、PDK1-siRNA-2组和PDK1-siRNA-3组)细胞的总RNA和总卵白,采选及时荧光定量PCR检测各组PDK1mRNA的抒发情况,卵白萍踪法检测各组PDK1卵白的抒发情况;(5)CellCountingKit-8(CCK-8)法检测PDK1-siRNA对小鼠骨髓巨噬细胞增殖智力的影响。 智立中特（武汉）生物科技有限公司是一家集生物研发，坐褥，销售，售后为一体的高新技艺产业公司。领有载体质粒，载体，国表里微生物菌种资源，感受态细胞，培养基，细胞株等庸碌的坐褥销售线。　　质粒载体家具：　　提供各式类型载体宿主，基因种属类型，抗性，策画并构建质粒：大肠杆菌抒发载体；哺乳动物抒发载体；酵母抒发载体；虫豸抒发载体；植物抒发载体；广;腺病毒载体...常用有pACYC184；pACYCDuet-1；pASK-IBA5plus+FUS(东说念主基因）；pAX01；pBABE-Puro；pBAD24pBI121；pBIFC-bFosVC155；pBIFC-VC15；pCDFDuet-1；pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro；pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-puro；pBIFC-VN155(I152L)addgene27097；pCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro；pCAGGS；pBiFC-VN173(Plasmid#22010)；pBlueScriptSK(+)；pBlueScriptIISK(+)；pBV220；pCas；pCas9pBR322；pBT3-STE；pBudCE4.1以及伙同窜改质粒RP4；pGL4.25[luc2CP/minP];pGR106;pIRES2-AcGFP1-Nuc;psfGFP;pHEN1;pNL1.1[Nluc];pBBR1-GFP；pBMTB-5;pBMTB-4;pBMTB-3;pBMTB-2;pCAMBIA0305.1;pCX-DR;;pGreenII0800-miRNA;pK7GWIWG2(I);pRARE;pDG1663　　质粒菌种家具：E.coliNissle1917；USA300：大肠杆菌JM108；希瓦氏菌属MR-1；E.coliW3110野生型；酿酒酵母W303a；酿酒酵母invsc1；酿酒酵母BY4741；酿酒酵母BY4742；毕赤酵母SMD1168H；PseudomonasputidaKT2440；E.coliMC1061；枯草芽孢杆菌WB800；根癌农杆菌EHA105；根癌农杆菌GV3101；CEN.PK2-1D；CEN.PK2-1C；全耐药鲍曼不动杆菌；哈维弧菌BB170　　菌种家具：　　提供模式菌种，科研菌种，普通菌种等菌种资源，有证质控样品等微生物范例品，芽孢悬液。常用药典菌种如：大肠埃希氏菌CMCC（B）44102、黑曲霉CMCC（F）98003,白色念珠菌CMCC(F)98001,枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501,铜绿假单胞菌CMCC（B）10104,生孢梭菌CMCC（B）64941;常用益生菌：长双歧杆菌（Bifidobacteriumlongum）,嗜热链球菌（Streptococcusthermophilus），鼠李糖乳杆菌（Lactobacillusrhamnosus），类干酪乳杆菌（Lactobacillusparacasei），干酪乳杆菌（Lactobacilluscasei）；常用真菌：松口蘑Tricholomamatsutake，灰葡萄孢bio-81601cfcc50437Botrytiscinerea；灵芝，香菇，茯苓等　原代细胞和细胞系家具：　　现取不同组织现分：不同着手东说念主/鼠/兔/猪等不同组织如肺、气管、支气管、甲状腺、胰腺、垂体、肾上腺、扁桃体、胸腺、肾、膀胱、输尿管、前方腺、腹黑、血管。常用原代细胞有：气管上皮细胞；前方腺上皮细胞；膀胱上皮细胞；输尿管上皮细胞；肾足细胞；内皮祖细胞；输卵管上皮细胞；乳腺上皮细胞　　公司提供细胞系东说念主源作念过STR温情，其他作念过种属温情，确保家具无误后方可提供客户，步地冻存或复苏从简客户时候；确保执行告成。常用细胞系有：WB-F344细胞；RG2[D74]细胞；NRK细胞；A7r5细胞；L6细胞；UMNSAH/DF-1细胞；MDBK(NBL-1)细胞；MDBK细胞；CCC-SMC-1细胞；PtK1(NBL-3)细胞；Mv1Lu细胞；Mv.1.Lu(NBL-7)细胞；F81细胞；CRFK细胞；MLTC-1细胞；MS1细胞；C3H/10T1/2,Clone8细胞；GL261细胞；P3X63Ag8.653细胞；HCC38细胞；ZR-75-30细胞；SK-LU-1细胞；NCI-H2087细胞；SK-N-MC细胞；Hs895.T细胞   哥要搞